Эмбриологический протокол

Центральным звеном любой ВРТ-клиники является эмбриологическая лаборатория.
Здесь сконцентрировано множество сложнейшей техники, которая помогает организовать условия для развития эмбрионов. Но даже эта современная техника будет бессильна без соответствующего специалиста - эмбриолога.

Эмбриолог ТОО "Семейный Врач и Со" занимается:

• подготовкой половых клеток к оплодотворению;
• выбирает качественные гаметы для ИКСИ;
• получает ооциты во время пункции фолликулов;
• проводит непосредственно оплодотворение одним из выбранных методов (стандартное ЭКО, ИКСИ);
• работает со сложным мужским фактором – выделяет сперматозоиды из биоптата яичка (TESA, TESE) и использует их для оплодотворения ооцитов;
• оценивает развитие эмбрионов;
• обеспечивает оптимальные условия для культивирования;
• отбирает эмбрионы для переноса в полость матки и для криоконсервации;
• проводит вспомогательный хетчинг;
• делает биопсию эмбриона для проведения предимплантационной генетической диагностики – ПГД 
• подготавливает эякулят для искусственной внутриматочной инсеминации;
• проводит подготовку спермы и ее криоконсервацию для длительного хранения;
• замораживает эмбрионы
• размораживает половые клетки и эмбрионы;

Протокол культивирования эмбрионов. Эмбриологический протокол.

В процессе своей работы при каждом ЭКО  эмбриолог заводит «Протокол культивирования эмбрионов». В него заносятся данные пациентов с момента получения ооцитов и спермы до момента переноса или криоконсервации эмбрионов: оценка полученных ооцитов в день пункции, данные спермограммы, метод оплодотворения, оценка оплодотворения и этапы развития каждого эмбриона до 6го дня. Такие протоколы помогают и репродуктологам и эмбриологам, чтобы в случае неудачной попытки правильно подготовить пациента к следующей и внести необходимые изменения в протокол. Мы по вашему запросу готовы предоставить данный протокол.

Пример эмбриологического Протокола:

Расшифровка эмбриологического протокола: 

Столбец 0 - это день пункции - день ноль. ООК - означает ооцит-кумулюсный комплекс. 

• Для оплодотворения методом ЭКО: данная оценка осуществляется эмбриологом визуально. В этом случае нельзя со полной уверенность судить о зрелости ооцитов, так как для такого оплодотворения ооциты не очищаются от клеток кумулюса. Если ОКК выглядит плотным и темным, то он оценивается эмбриологом как «0». Если ОКК выглядит рыхлым и прозрачным, то он, как правило, содержит зрелый ооцит и получает оценку «1». Если на следующий день, после очистки ооцитов от клеток кумулюса и проверки оплодотворения, данный ооцит действительно был зрелым, то оценка выглядит как «1-1», если ооцит оказался не зрелым, то оценка будет «1-0».
• Для оплодотворения методом ИКСИ: данная оценка проводится через час после получения ОКК, которые обрабатываются ферментом, чтобы отделить ооциты от лишних клеток. В этом случае эмбриолог с уверенностью может говорить о количестве зрелых (пригодных для оплодотворения) ооцитов.
  • • MII - Зрелый ооцит обозначается как 
    • MI, GV – Не зрелые ооциты – для оплодотворения не подходят, ооциты стадии MI могут дозреть в чашке, но зиготы, полученные после такого оплодотворения, как правило, не дают хороших эмбрионов.
    • ABN – абнормальный ооцит – для оплодотворения не подходит. Может быть без оболочки, иметь включения в цитоплазме, неправильную форму и т.д. Может быть как зрелым так и не зрелым.
    • ATR – атретичный (дегенеративный) ооцит – для оплодотворения не подходит.

Только хорошие ооциты подходят для оплодотворения.

Далее эмбриолог следит за действием буквально по часам, т.к возможны разные аномальные варианты развития, которые в клинике обязательно отслеживают и культивируют отдельно. Через 16-18 часов после проведения оплодотворения в ооците появятся специфические округлые структуры – пронуклеусы. Это предшественники ядер, содержащие генетический набор как мамы, так и папы.

Столбец 1 – день проверки оплодотворения – день 1.

• 2PN – два пронуклеуса. Нормальное оплодотворение. Именно такие эмбрионы культивируют дальше.
• NF – пронуклеусов нет. В этом случае оплодотворение либо наступило, но пронуклеусы слишком быстро исчезли, что эмбриолог не успел их увидеть, либо ооцит просто не оплодотворился. 
• 1PN – один пронуклеус. В 25% случаев при 1PN эмбрион может быть диплоидным. 

Такие ооциты (NF, 1PN) откладываются в отдельныю капли и за ними также наблюдают. Если из такого ооцита получается отличный эмбрион, то вопрос о его переносе или заморозки решается совместное с репродуктологом, эмбриологом и пациентом. 

• NS – ооцит не выжил после процедуры ИКСИ.
• 3PN и более. Это – аномальный эмбрион. Перенос такого эмбриона запрещен, так как приводит к замершей беременности с тяжелые последствиями. В клинике такие эмбрионы никогда не используют.

Дальнейшее развитие эмбриона, дробление, происходит в течение 6 дней.  

Для культивирования эмбрионов в клинике используются передовые одноступенчатые среды, которые позволяют «оставить в покое» эмбрионы до 5го дня развития.

Через сутки эмбрион уже состоит из 6-8 бластомеров. До этого момента эмбрион развивался исключительно на материнских «запасах», накопленных в яйцеклетке за время ее роста и развития в яичнике. Однако если «генетическая программа», в которой закодированы этапы нормального развития эмбриона, содержит ошибки, эмбрион (4-19% случаев) останавливается в развитии не достигнув стадии бластоцисты – так называемый «блок развития». Это природный процесс отбора генетически нормальных эмбрионов.
Наиболее точная (эффективная) оценка эмбрионов происходит на стадии бластоцисты (5-6 день после оплодотворения). И если «лучшая» бластоциста выросла из «худшего» ооцита, максимальные шансы на успешное ЭКО будут все-таки у нее. Поэтому, уважаемые пациенты, не стоит узнавать ежедневно судьбу каждого эмбриончика. Наберитесь терпения, скоро все станет предельно ясно!
Эмбриологи используют численно–буквенную систему оценки качества, где первая цифра означает количество бластомеров, буква их качество, а вторая цифра оценка фрагментации:

• Тип A1 – эмбрион с равными бластомерами, отличного качества без ануклеарных (безъядерных) фрагментов (например, 4А1 – четырех клеточный «отличник»).
• Тип В2 – эмбрион хорошего качества с содержанием ануклеарных фрагментов до 20% (4В2) 
• Тип С – эмбрион удовлетворительного качества с содержанием ануклеарных фрагментов от 21% до 50% (4С3)
• Тип D – эмбрион неудовлетворительного качества с содержанием ануклеарных фрагментов более 50% (4D4)

Столбец 5,6 – день переноса и/или криоконсервации – день 5 и 6

При классификации бластоцист в обозначении указывают:

• цифру (от 1 до 6) – она обозначает степень развития эмбриона:

1 – полость бластоцисты меньше, чем половина целого эмбриона
2 – полость бластоцисты больше, чем половина целого эмбриона
3 – полная бластоциста, полость заполняет почти весь эмбрион
4 – развитая бластоциста, полость включает весь эмбрион, тонкая оболочка
5 – бластоциста пробивается из оболочки
6 – бластоциста без оболочки

• первую букву (А, B, C), означающую качество внутриклеточной массы, из которой будет развиваться зародвш:

A – много клеток, плотно упакованные
B – несколько клеток, свободно сгруппированные
C – очень немного клеток

• вторую букву (А, B, C), которая обозначает качество трофэктодермы (TE), которая обеспечит прикрепление эмбриона к эндометрию и разовьется в плаценту:

A – много клеток, образуют единый слой
B – мало клеток, образуют свободный эпителий
C – очень мало крупных клеток

Репутация эмбрионов

И это еще не все. Существует такое понятие как «репутация эмбриона». Репутация эмбриона складывается из множества факторов, полученных в процессе наблюдения за их «поведением» с 1 по 6 день жизни. Учитывается все: какой эмбрион развивался лучше, какой быстрее дробился, ка

к вел себя на каждом этапе – все это в итоге влияет на судьбу эмбриона. Поэтому иногда из двух эмбрионов с разными характеристиками, например, 5АА и 5АB, эмбриолог выбирает для пересадки второй эмбрион, с «неидеальными», казалось бы, показателями.

И еще немного об эмбриологии

• Существуют и дополнительные способы прогноза имплантации эмбриона (time-lapse, ПГС, анализ метаболитов и др.), которые дополняют морфологические критерии и обеспечивают в совокупности выбор лучшего эмбриона.
• При естественном оплодотворении эмбрион оказывается в матке только спустя 5 дней, поэтому, следуя природным стандартам, специалисты проводят подсадку на 5-е сутки. 

ЭКО - процесс, к которому нужно подходить индивидуально, учитывая все нюансы, способные повлиять на его результат.  

• Искусственное оплодотворение требует скрупулезности, перфекционизма и строгости в соблюдении всех стандартов работы. 
• Также надо отметить, что качество эмбриона не имеет прямой связи с шансами и исходами беременности. На наступление и развитие беременности влияет очень много факторов. И каждый случай индивидуален.